NSCLC靶向用药治疗新思路——一款辅助临床研究的试剂盒

编者按：

肺癌是当今世界范围内常见的恶性肿瘤，因其发病率和死亡率极高，位列全球癌症死亡之首。而非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，简称NSCLC）是最为常见的肺癌，占肺癌患者总数的80%-85% 。目前NSCLC的治疗方法主要包括手术、放射治疗、免疫治疗、化疗和药物靶向治疗的结合。在就诊时有70%左右的NSCLC患者因病灶进展不能切除，或因患者年龄较大等原因不能接受手术治疗。因此，靶向药物治疗成为这些患者的首选。

基因检测可以指导NSCLC靶向药物治疗，根据基因检测结果选择对应的靶向药，不但可以提升药物的有效率，延长患者生存期，还能减少患者因药物治疗带来的不良反应。

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前段时间，联川生物在2017CSCO会议上首次发布NSCLC靶向用药液态活检新产品——VariantPro^TM Lung Cancer Gene Mutation Detection Kit。产品一经发布受到众多企业和老师的喜爱和追捧，纷纷前来展位进行产品咨询，希望能共同解决在NSCLC患者靶向用药治疗上的技术难点，目前已有一些企业与我们达成合作。

但想必还有很多人并不了解此款试剂盒的独特之处，今天小编就和大家一起来一探究竟，揭开这一产品的神秘面纱。

这是一款怎样的产品呢？

VariantPro^TM Lung Cancer Gene Mutation Detection Kit是一款基于联川生物PCT专利技术——VariantPro^TM一步法靶向文库制备系统，研发的用于检测NSCLC靶向用药相关基因的试剂盒。

此款试剂盒100%覆盖与NSCLC靶向用药相关的10个基因，共154个热点突变位点，检测突变频率可低至0.1%。具体试剂盒详情如下：

这款产品是如何设计的？

根据国内外权威指南及肿瘤研究数据库，共选择出10个与NSCLC靶向用药相关的基因，分别是EGFR、ALK、ERBB2、BRAF、KRAS、AKT1、MAP2K1、PIK3CA、NRAS、TP53，共154个热点突变位点。

本试剂盒采用全新的RelayPCR^TM和OmegaPrimer^TM技术，使用高特异性的独特引物，将目标序列进行抓取，并进行多重PCR，使得运行一次多重PCR，即完成从特异性捕获成百上千个靶向序列（区域）到高均一性测序文库制备的全过程。（详细原理请查看文末相关阅读）

为确保低频变异筛选的准确性，在试剂盒的设计中使用Molecular Tag（分子标签）标记单个DNA分子，将最原始的DNA分子唯一性地捕获并标识。后期对分子标签相同的分子进行归集，在数据处理上消除了假阳性结果。

（分子标签工作流程）

如何使用这款产品？

简便快捷的检测流程：此款试剂盒文库制备只需5分钟人工操作，全程无需开管转管操作。

快速精准的标准试验：从样本提取到报告出具全程仅需4个自然日，检测突变频率可低至0.1%。

（检测流程图）

这款产品性能如何？

1. 我们使用Horizon FFPE标准品（HD200）*进行此款试剂盒针对FFPE样本的性能指标测试。结果显示，该试剂盒覆盖标准品的8个位点，在不同样本起始量10 ng~50 ng时，试剂盒均能准确检出标准品内所含的突变信息。

*该标准品通过基因工程方法得到相应突变类型的细胞系，后模拟成FFPE样本，并经过digital PCR (数字PCR)验证。Horizon公司通过数字PCR验证其产品。

（VariantPro^TM  Lung Cancer Gene Mutation Detection Kit 检测石蜡包埋组织（FFPE）DNA的准确度和灵敏度）

2. 我们再次使用Horizon cfDNA标准品（HD780)*进行试剂盒的性能验证，每个频率梯度的标准品都进行了双重复或三重复实验。结果显示，此款试剂盒覆盖HD780标准品8个位点中的6个位点，其灵敏度和特异性数值基于6个真阳性位点和试剂盒覆盖的其余148个真阴性位点计算。

*该标准品通过基因工程方法得到，含有8个经过数字PCR技术验证的单核苷酸突变（SNVs或SNPs），并存在4种频率梯度，分别是0.0%、0.1%、1%、5%水平。

（VairantPro^TM Lung Cancer Gene Mutation Detection Kit 检测cfDNA的灵敏度和特异性）

3. 另一边，我们使用本试剂盒，起始量采用40 ng/pool，检测Horizon cfDNA标准品（0.1%水平）。结果显示panel覆盖的6个标准品位点与Horizon数字PCR验证结果一致，表明本试剂盒针对cfDNA的检测灵敏度可达到0.1%水平。

（VariantPro^TM Lung Cancer Gene Mutation Detection Kit 检测HorizoncfDNA标准品（0.1%水平））

4. 本试剂盒由27条扩增子，共2个pool构成。使用本试剂盒，Horizon cfDNA标准品（0.1%水平）起始量采用 40 ng/pool，扩增子的平均覆盖深度130,000x，family*的分布情况如图所示。

*Family理论上代表捕获的原始模板分子。

（扩 增 子 覆 盖 深 度 及 分 子 标 签 归 集 后 的 f a m i l y分 布）

产品小结

VariantPro^TM  Lung Cancer Gene Mutation Detection Kit提供了一项简单快捷、可靠的非小细胞肺癌靶向用药相关基因的检测方案，检测灵敏度在血浆或FFPE中均可达到0.1%，最高可达0.3‰。在ddPCR平台上进行验证，一致性高达99.9%。

使用VariantPro^TM 技术，在illumina平台上从样本提取到报告出具总体需要4个自然日，少于目前市面上其它类型液体活检检测周期。使用本试剂盒文库制备只需5分钟人工操作，全程无需开管转管操作，适用于临床NGS研究。

联川生物的液态活检技术，可针对癌症靶向用药相关的位点进行检测，适用于illumina平台，同时也在Life Ion Torrent、BGI-SEQ 500平台上进行适配。目前已开发出与非小细胞肺癌靶向用药相关的10基因检测试剂盒，未来会在商品化试剂盒中上线结直肠癌与乳腺癌液态活检试剂盒。

今天小编对于VariantPro^TM  Lung Cancer Gene Mutation Detection Kit的介绍就到这里了，如果您还有一些疑问。欢迎微信后台回复“肺癌+邮箱”，获得更多此款产品信息。

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